二氧化碳培养箱的常见污染

　　混入二氧化碳培养箱(细胞培养环境)中，对细胞生存有害的成分和造成细胞不纯的异物都应视为污染。不同的污染物对细胞的影响也有差别，有的影响是长期、缓慢和潜在的，而有的则能在很短的时间内抑制细胞生长或产生有毒物质细胞。根据污染源不同主要可以分为：生物性污染、化学性污染、物理性污染和气溶胶污染。

　　1、生物性污染：

　　这是最常见也是危害最大的污染。如细菌、病毒、真菌，支原体等。这些污染源有可能是人为带入，或是细胞在放入二氧化碳培养箱前已经受污染，再或者是箱体本身没有消毒干净。体外培养的细胞自身没有抵抗污染的能力，而培养基中所加抗生素的抗微生物污染的能力也是有限的，因而细胞微生物污染一旦发生往往是无法挽救的。

　　2、化学性污染：

　　二氧化碳培养箱中许多化学物质都可以引起细胞污染。如细胞培养容器清洗过程中残留的洗涤剂、加湿器中未纯化的水、人为带入的液体或气体都可能成为化学性污染的来源。不同化学物质对细胞污染是不一样的，有的可能促进或抑制细胞生长，有的甚至杀死细胞。

　　3、物理性污染：

　　培养环境中的物理因素，如温度、放射线、振动、辐射(紫外线或荧光)会对细胞产生影响。物理性污染常常被人们所忽视或被笼统地归为化学性污染，其主要是在代谢水平或分子水平上，影响细胞正常的生理过程。

　　4、气溶胶污染：

　　气溶胶是液体或固体微粒均匀地悬浮在气体介质中的分散体系，当微粒是微生物时，就是微生物气溶胶，如果这种微生物是病原性的，就是病原微生物气溶胶。细菌、病毒等病原体通过气溶胶可在人与人、人与环境之间传播。

二氧化碳培养箱污染防控措施

　　1、二氧化碳培养箱的选择：

　　二氧化碳培养箱的制造商们设计了多种不同的装置去减少和防止污染的发生，其主要是防污染设计和消毒灭菌系统的改进，以达到消毒灭菌的目的。如带有紫外消毒功能的二氧化碳培养箱、带HEPA过滤器的二氧化碳培养箱，以及带高温消毒的二氧化碳培养箱等，后者又分为高温干热和高温湿热两类。这些装置的灭菌能力各有千秋，紫外灯消毒范围有限，距离灯越远，消毒能力越差。

　　HEPA过滤器的过滤膜孔径有限，无法去除病毒和一些微小细菌，并且容易损耗，也有其局限性。相比而言，高温消毒则是比较有效的方法。而高温干热和高温湿热也有所不同，由于蒸汽潜热大、穿透力强，容易使蛋白质变性或凝固，因此高温湿热的灭菌效率比干热灭菌法高。

　　2、提高素质：

　　人为因素和态度可以对环境、人和物起到一个正面或负面的影响。以安全为目的，实验室内的工作人员应明白自身的态度和人为因素对实验环境的重要性。因此，对实验室工作人员进行培训。

　　3、重视管理：

　　细胞室内的二氧化碳培养箱应由专人负责管理，定期对系统进行校正，至少每年一次。各项数值一旦固定后，不要随意调节，以免影响箱内温度、湿度、CO2浓度的波动，降低机器的灵敏度，同时还会影响二氧化碳培养箱内的细胞生产状态。

　　使用前，对二氧化碳培养箱的各项指标进行系统校正，并且对箱体和内部进行消毒处理，等各项数值稳定一段时间后方可使用。一旦出现紧急问题，应及时上报，应由专业的人员进行操作，马上采取应对措施，以免造成不必要的损失。

　　4、规范操作：

　　二氧化碳培养箱的使用虽然很简单，但同样需要规范操作。进细胞室必须穿着实验服(白大褂)，换上拖鞋或者穿一次性的鞋套。实验操作时必须带一次性手套，特别是打开二氧化碳培养箱前，必须先用75%的酒精喷壶喷洗双手再开二氧化碳培养箱，再取出细胞培养瓶或培养板。显微镜下查看细胞培养瓶或培养板后，再放回二氧化碳培养箱时，同样也要喷酒精消毒。

　　二氧化碳培养箱的两个门开关取(放)物要迅速，不可长时间开着，否则会影响CO2的浓度、温度和湿度，以及造成污染。尤其是不要忘了关好里层的玻璃门。切记开门时不要对着二氧化碳培养箱说活，大口呼吸甚至是打喷嚏。

　　5、加强防护：

　　如果实验人员生病而携带病菌，应带上口罩再进细胞室，病情严重的则不宜进行实验。女性同志实验时头发应梳起，防止皮屑污染及连带事件的发生。如果实验室条件允许，可以每人佩戴实验帽、手套和口罩，以防污染二氧化碳培养箱及对实验人员的自身的防护。

　　6、注重保养：

　　二氧化碳培养箱置于细胞室中，室内需保持干燥，环境温度不能超过30℃(建议：18℃-30℃)。二氧化碳培养箱放置在远离门窗、供暖设备和空调导管的地方，不能被阳光直接照射。二氧化碳培养箱的放置台面必须水平避震且非易燃材质，不能靠在墙壁或类似的建筑物上，其后部接电处和墙壁至少保留30cm的空间。一旦放好不宜再移动。